Elektroforēze: kas tas ir, kam tas paredzēts un kā tas tiek darīts

Elektroforēze ir laboratorijas paņēmiens, kas tiek veikts ar mērķi atdalīt molekulas pēc to lieluma un elektriskā lādiņa, lai varētu diagnosticēt slimības, pārliecināties par olbaltumvielu ekspresiju vai identificēt mikroorganismus.

Elektroforēze ir vienkārša un lēta procedūra, ko izmanto laboratorijas darbā un pētniecības projektos. Atbilstoši elektroforēzes mērķim var būt nepieciešams veikt citus testus un eksāmenus, piemēram, lai sasniegtu diagnozi.

Kam tas domāts

Elektroforēzi var veikt vairākiem mērķiem, gan pētniecības projektos, gan diagnostikā, jo tā ir vienkārša un lēta tehnika. Tādējādi elektroforēzi var veikt, lai:

• Identificējiet vīrusus, sēnītes, baktērijas un parazītus, no kuriem visizplatītākais ir šāds pielietojums pētniecības projektos; Paternitātes pārbaude; Pārbaudiet olbaltumvielu izpausmes; Identificējiet mutācijas, kas noder, piemēram, leikēmijas diagnostikā; Analizējiet cirkulējošā hemoglobīna veidus noderīga sirpjveida šūnu anēmijas diagnosticēšanā; Novērtējiet olbaltumvielu daudzumu asinīs.

Atbilstoši elektroforēzes mērķim ārstam var būt nepieciešams veikt citas papildu pārbaudes, lai pabeigtu diagnozi.

Kā tas tiek darīts

Elektroforēzes veikšanai ir nepieciešams gēls, kas atkarībā no objektīva var būt no poliakrilamīda vai agarozes, elektroforēzes buferis un tvertne, molekulmasas marķieris un fluorescējoša krāsa, papildus UV vai LED gaismas iekārtai, kas pazīstama arī kā transilluminator.

Pēc želejas sagatavošanas ir jānovieto noteikts priekšmets, lai iedobes tiktu izgatavotas želejā, tautā sauktu par ķemmi, un ļautu želejai nostāties. Kad želeja ir gatava, vielas vienkārši uzklājiet uz iedobēm. Šajā nolūkā vienā no iedobēm jāievieto molekulmasas marķieris, pozitīvā kontrole, kas ir viela, par kuru ir zināms, kas tā ir, negatīvā kontrole, kas garantē reakcijas derīgumu, un analizējamie paraugi. Visi paraugi jāsajauc ar fluorescējošu krāsu, jo tādā veidā ir iespējams vizualizēt joslas uz transiluminatora.

Gēls ar paraugiem jāievieto elektroforēzes tvertnē, kurā ir konkrētais buferšķīdums, un pēc tam ierīci ieslēdz tā, lai būtu elektriskā strāva un attiecīgi arī potenciāla starpība, kas ir svarīgi atdalīšanai daļiņas pēc to slodzes un lieluma. Elektroforētiskās darbības laiks mainās atkarībā no procedūras mērķa un var ilgt līdz 1 stundai.

Pēc noteiktā laika ir iespējams apskatīt elektroforēzes rezultātu caur transilluminatoru. Kad želeju novieto UV vai LED gaismā, ir iespējams vizualizēt joslas modeli: jo lielāka ir molekula, jo mazāka ir tās migrācija, tuvojoties urbumam, savukārt, jo gaišāka ir molekula, jo lielāks ir migrācijas potenciāls.

Lai reakcija būtu validēta, jā vizualizē pozitīvās kontroles joslas, un negatīvajā kontrolē nekas nedrīkst tikt vizualizēts, jo pretējā gadījumā tā ir norāde, ka ir noticis piesārņojums, un viss process ir jāatkārto.

Elektroforēzes veidi

Elektroforēzi var veikt dažādiem mērķiem, un atbilstoši tā mērķim var izmantot vairākus gela veidus, no kuriem visizplatītākais ir poliakrilamīds un agaroze.

Elektroforēze mikroorganismu identificēšanai biežāk jāveic pētījumu laboratorijās, tomēr diagnostikas nolūkos elektroforēzi var izmantot, lai identificētu hematoloģiskas slimības un slimības, kas attīstās līdz ar olbaltumvielu daudzuma palielināšanos, kas ir galvenie elektroforēzes veidi.:

1. Hemoglobīna elektroforēze

Hemoglobīna elektroforēze ir laboratorijas paņēmiens, kas tiek veikts, lai identificētu dažādus hemoglobīna veidus, kas cirkulē asinīs, ļaujot noteikt ar hemoglobīna sintēzi saistītu slimību klātbūtni. Hemoglobīna veidu identificē ar elektroforēzes palīdzību pie noteikta pH līmeņa, ideālā gadījumā no 8, 0 līdz 9, 0, pārbaudot joslu modeli, ko var salīdzināt ar parasto modeli, ļaujot noteikt patoloģisku hemoglobīnu klātbūtni.

Kādam nolūkam tas tiek darīts: Hemoglobīna elektroforēze tiek veikta, lai izpētītu un diagnosticētu ar hemoglobīna sintēzi saistītas slimības, piemēram, sirpjveida šūnu anēmiju un C hemoglobīna slimību, papildus tam, ka tā ir noderīga talasēmijas diferencēšanā. Uzziniet, kā interpretēt hemoglobīna elektroforēzi.

2. Olbaltumvielu elektroforēze

Olbaltumvielu elektroforēze ir ārsta pieprasīts eksāmens, lai novērtētu asinīs cirkulējošo olbaltumvielu daudzumu un tādējādi identificētu slimības. Šo pārbaudi veic no asins parauga, ko centrifugē, lai iegūtu plazmu - asins daļu, kas, cita starpā, satur olbaltumvielas.

Pēc elektroforēzes var vizualizēt joslu modeli un pēc tam diagrammu, kurā norādīts katras olbaltumvielu frakcijas daudzums, kas ir diagnozes pamatā.

Kā tas tiek darīts: Olbaltumvielu elektroforēze ļauj ārstam izmeklēt multiplās mielomas, dehidratācijas, cirozes, iekaisuma, aknu slimību, pankreatīta, vilkēdes un hipertensijas rašanos atbilstoši joslu shēmai un diagrammai, kas parādīta pārbaudes ziņojumā.

Saprast, kā tas tiek darīts un kā izprast olbaltumvielu elektroforēzes rezultātu.