Molekulārā diagnoze atbilst molekulāro paņēmienu kopumam, kura mērķis ir noteikt izmaiņas DNS, kas varētu liecināt par, piemēram, ģenētiskām slimībām vai vēzi. Turklāt molekulārie paņēmieni tiek plaši izmantoti infekcijas slimību identificēšanai un apstiprināšanai, jo tie ir ātrāka un precīzāka diagnozes metode.
Molekulārā diagnostika ir dārga, un tāpēc ārsti to neprasa ļoti bieži, tomēr tā sniedz precīzus rezultātus attiecībā uz izmaiņu klātbūtni, veidu, kā tās var traucēt organisma darbību un pacienta reakciju uz ārstēšana.
Kam tas domāts
Molekulāro diagnostiku var veikt ar vairākiem mērķiem, no kuriem galvenie ir:
- Ar leikozi saistītu mutāciju identificēšana, piemēram, BCR-ABL translokācijas identificēšana, kas raksturīga hroniskai mieloīdai leikozei (CML); Hematoloģisko slimību raksturīgās mutācijas, piemēram, iedzimta hemochromatosis, polycythemia vera, būtiska trombocitēmija un trombofilija, piemēram Molekulāras izmaiņas, kas norāda uz vēža, piemēram, kolorektālā, plaušu, krūts un smadzeņu vēža, rašanos; Papildus HPV vīrusa identificēšanai tiek diagnosticētas arī infekcijas slimības, piemēram, hepatīts, uretrīts, toksoplazmoze, leišmanioze utt.
Molekulārā diagnoze, neskatoties uz to, ka salīdzinājumā ar citām diagnostikas metodēm tiek uzskatīta par dārgu, ir precīzāka, jo tā spēj informēt par izmaiņām, kas saistītas ar noteiktu slimību, un par šo izmaiņu ietekmes pakāpi organismā, tādējādi palīdzot personas ārstēšanai.
Papildus molekulārajām metodēm, ko izmanto dažādu slimību diagnosticēšanai, tiek izmantotas arī reakcijas uz ārstēšanu novērtēšanai, īpaši cilvēkiem ar vēzi, un tā ir viena no efektīvākajām metodēm, lai norādītu uz slimības progresēšanu un recidīvu.
Kā tas tiek darīts
Molekulāro diagnozi var veikt ar jebkuru paraugu, ko pieprasa ārsts un kurš vislabāk var sniegt informāciju par pacienta stāvokli, kas var būt urīns, siekalu vai vairumā gadījumu asinis. Eksāmenam nav nepieciešama badošanās vai cita sagatavošanās.
Paraugu savāc un nosūta uz laboratoriju kopā ar ārsta norādījumiem, kas informē par eksāmenu vai veicamo pētījumu veidu. Veiktie molekulārie paņēmieni ir atkarīgi no pieprasītā eksāmena, un tie ietver precīzu procedūru sēriju, kuru mērķis ir noteikt ārsta pieprasītās izmaiņas vai to neesamību.
Parasti tiek izmantots tikai neliels nosūtīto paraugu daudzums, pārējais tiek glabāts tā, lai vajadzības gadījumā eksāmens tiktu atkārtots.
Skatiet, kādi ir galvenie molekulārie paņēmieni
PCR
PCR, saīsināts no polimerāzes ķēdes reakcijas vai polimerāzes ķēdes reakcijas , ir molekulāra tehnika, kas sastāv no ģenētiskā materiāla fragmenta, vai nu DNS, vai RNS, amplifikācijas ar mērķi identificēt mutācijas un tādējādi palīdzēt diagnosticēt slimības.
Šis paņēmiens ir iegūts no ģenētiskā materiāla ekstrakcijas un attīrīšanas, kuru pēc tam ievieto maisījumā, kurā viens no komponentiem ir restrikcijas enzīms, kurš mainās atkarībā no pieprasītās pārbaudes un kura funkcija ir sagriezt materiālu fragmentos. lai varētu identificēt iespējamās ģenētiskās izmaiņas. Maisījumu ievieto termociklerā, kas ir ierīce, kas darbojas ar temperatūras svārstībām, kuras saskaņā ar eksāmenu norādījis profesionālis, un tādējādi ļauj pastiprināt ģenētisko fragmentu. Parastās PCR gadījumā pēc amplifikācijas PCR produktu pakļauj elektroforēzei, kas ir molekulārs paņēmiens, kura pamatā ir fragmentu svars un lielums, tas ir, saskaņā ar šīm īpašībām tiek izveidots joslu modelis, kura analīze tiek veikta. pamatojoties uz pozitīvās kontroles joslu, tas ir, joslu, kas zināma kā atbilstoša ģenētiskajām izmaiņām.
Reālā laika PCR, ko sauc arī par qPCR, ir kvantitatīvas PCR tips, tas ir, papildus ģenētisko izmaiņu identificēšanai, tā spēj sniegt informāciju arī par gēnu ekspresiju, tas ir, par to, cik daudz mainītā gēna tiek izteikta organismā. tādējādi to var izmantot diagnozes atvieglošanai un ārstēšanas uzraudzībai. Reālā laika PCR nav nepieciešama elektroforēze, visu ģenētiskā materiāla pastiprināšanas un analīzes procesu veic ierīce, un rezultātu interpretē apmācīts veselības speciālists.
Secība
Secināšana ir molekulārā tehnika, kas sastāv no DNS nukleotīdu secības noteikšanas, kas ir ģenētiskā materiāla veidojošās vienības. Sekvenēšana notiek no reakcijas, kas līdzīga PCR, tomēr amplifikācijas maisījumā modificētus nukleotīdus pievieno, pievienojot fluorhromus, kuri kā materiāls tiek pastiprināts, modificētie nukleotīdi tiek iestrādāti DNS un rada vairākus fragmentus, kas atbilst sekvencēšanas produktam.
Reakcijas produktu ievieto ierīcē, ko sauc par DNS sekvenceru, kurā, kad fragmenti tiek sasniegti ar iekārtas lāzeru, fluorhromi tiek ierosināti, izstarojot fluorescenci, ko iekārta norāda ar pīķiem, ar katru pīķi atbilstošu. uz nukleotīdu. Reakcijas beigās aprīkojums informēs DNS secību, tādējādi palīdzot ārstam diagnosticēt ģenētiskās slimības.
